基因敲除

根据目的基因序列设计合成sgRNA,将Cas9和sgRNA基因转染目的细胞,通过sgRNA引导Cas9核酸酶对目的基因位点进行切割,引起DNA双链断裂(DSB),通过细胞自身的非同源末端修复(NHEJ)途径造成目...

  根据目的基因序列设计合成sgRNA,将Cas9和sgRNA基因转染目的细胞,通过sgRNA引导Cas9核酸酶对目的基因位点进行切割,引起DNA双链断裂(DSB),通过细胞自身的非同源末端修复(NHEJ)途径造成目的基因片段缺失或移码突变,进而实现目的基因敲除。

  技术优势

  经过优化的CRISPR/Cas9系统,适用于更广泛的哺乳动物细胞,提高了编辑率高,同时大大降低了脱靶效应。

  多种方案可供选择,满足不同研究需要。

  实验流程

  


  敲除效率实验周期优点缺点

  PiggyBac转座酶整合方案高短操作方便不适用于转染效率低的细胞

  慢病毒感染方案高较长能感染大部分难转染细胞需要包装慢病毒

  瞬时转染方案低较长不整合外源基因到细胞基因组中耗时较长,阳性率相对较低

  服务标准

  客户提供:待敲除Gene ID;

  目的细胞(可选择由派致代购);

  完全培养基1-2 L(派致提供DMEM及1640常规培养基)。

  派致交付:按方指定案构建的细胞系及项目报告。

  交付周期:6-12周,具体时间取决于方案选择、敲除靶点复杂程度及细胞生长情况。